hTERT和survivin双靶点RNAi表达载体的构建及对人结肠癌SW480细胞的抑制作用
【出 处】:
【作 者】:
【摘 要】目的构建人端粒酶反转录酶(hTERT)和生存素(survivin)基因表达的RNA共干扰载体,并检测其对人结肠癌SW480细胞中hTERT基因和survivin基因的干扰作用。方法根据Genbank提供的hTERT和survivincDNA序列,设计、筛选出高效、特异性强的干扰序列,构建特异性干扰hTERT基因和survivin基因的重组体pGenesil-1.1-survivin、pGenesil.1.2-hTERT,酶切、测序鉴定正确后,两个重组体均用Hindnl和BamHI双酶切,将pGenesil-1.1-survivin回收大片段,pGenesil.1.2-hTERT回收小片段,将回收大、小片段用T4DNA连接酶定向连接,即构建成重组体pGenesill.1-survivin-hTERT。将3个重组体分别转染SW480细胞,RT-PCR检测细胞中hTERT和survivin基因表达水平,MTT检测对SW480细胞增殖的影响。结果构建的各质粒经限制性酶切及DNA测序均证明其质粒构建正确,RT-PCR检测hTERT和survivin基因表达水平明显降低(P〈0.05),各干扰质粒重组体对细胞增殖有明显的抑制作用(P〈0.05)。结论靶向survivin和hTERT基因的双干扰载体构建成功,为后续的结肠癌基因治疗研究奠定理论基础。
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