肠道病毒71型的全长cDNA感染性克隆的构建与鉴定
【出 处】:
【作 者】:
【摘 要】目的构建一株肠道病毒71型的全长cDNA克降并验证感染性。方法 用长片段高保真RT-PCR方法扩增肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的cDNA,装入pBR322载体。将该克隆线性化,体外转录后转染RD细胞后,通过观察CPE及RT—PCR验证其感染性。随后利用空斑法测定拯救病毒的一步生长曲线。结果成功构建厂肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的全长cDNA克隆;体外转录及转染RD细胞60h后可观察到明显的CPE现象;RT-PCR在转染RD细胞中枪测到病毒的存在;成功利用空斑法测定了拯救病毒的一步生长曲线,最大滴度达到2×10^7pfu/mL。结论成功构建了肠道病毒71型87-2008 Xi’an株的全长cDNA克隆并验证了其感染性,同时测定了拯救病毒的一步生长曲线,与野生型病毒相近。
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