优化明胶酶谱法检测白发性高血压大鼠血浆MMP-2和MMP-9活性
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【摘 要】目的 以优化明胶酶谱法检测F1发性高血压大鼠(SHR)血浆基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与-9(MMP-9)的活性。方法 以含明胶的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳酶谱法为基础,改变孵育时间、工作液成份,采用不同pH值的孵育液及不同冻融次数的样品,观察对基质金属蛋白酶(MMPs)活性的影响。并以优化的酶谱法检测Wistar及自发性高血压大鼠血浆MMPs的相对活性。结果凝胶孵育时间由42h缩短为17h不影响酶谱法检测结果。省略漂洗步骤及洗脱液仅使用2.5%Triton X-100、孵育液中去除NaN,及NaCl日电泳后步骤将去离子水更换为蒸馏水也不影响实验结果。孵育液pH值在7.2~8.8范围内均可用于酶谱法。血浆样品反复冻融多达6次不影响酶谱法枪测结果。用优化的酶谱法检测结果显示,与Wistar大鼠相比,SHR大鼠血浆MMP-2与MMP-9活性显著增高。结论优化酶谱法与常规办法相比更为简便经济,检测大鼠血浆MMP-2与MMP-9活性所得结果一致。
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