用慢病毒载体介导的RNAi感染CB3细胞后抑制FLI-1的表达
【出 处】:
【作 者】:
【摘 要】目的观察慢病毒载体介导的RNA干扰(RNAi)方法对小鼠红白血病细胞(CB3)中FLI-1基因表达的抑制作用。方法设计制备针对目的基因FLI-1的小干扰RNA(siRNA),构建制备目的基因的siRNA慢病毒载体,PCR阳性菌落进行测序鉴定,对慢病毒包装与滴度测定后感染CB3细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)表达情况。RT-PCR和Westernblot检测病毒感染CB3细胞后FLI-1的表达。结果成功构建了针对FLI-1基因的siRNA慢病毒载体,并包装成慢病毒颗粒,病毒滴度为1.5E+9TU/mL,并可将其高效感染CB3细胞,病毒感染后FLI-1在转录水平和翻译水平的表达量显著低于对照组和未感染病毒组(P〈0.001)。结论成功构建了针对FLI-1基因的siRNA慢病毒载体,并可有效抑制CB3细胞中FLI-1基因的表达。
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