人MutS同源蛋白2(hMSH2)过表达的肺癌细胞模型的构建
【出 处】:
【作 者】:
陆必超
沈青丽
李文利
李娟
陈慧
代玉梅
何维
中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院国家分子生物学重点实验室
北京100005
广州医科大学附属广州市妇女儿童医疗中心临床检验部/妇产科
广东广州510623
广州医科大学附属肿瘤医院检验科
广东广州510000
【摘 要】目的 构建人Mut S同源蛋白2(h MSH2)过表达的肺癌细胞模型,探究h MSH2分子介导γδT细胞杀伤肺癌细胞的效应。方法 PCR扩增h MSH2编码序列,同源重组法构建h MSH2-EGFP融合蛋白过表达载体;转染肺癌细胞系NCI-H520细胞以构建h MSH2分子过表达的NCI-H520细胞模型;Western blot检测细胞中h MSH2分子表达,流式细胞计量术检测细胞膜上h MSH2分子表达,体外扩增人外周血单个核细胞中的γδT细胞,乳酸脱氢酶释放法检测γδT细胞对过表达h MSH2的NCI-H520细胞的杀伤效率。结果 获得h MSH2编码序列(2 805 bp),构建Fugw-h MSH2重组载体,酶切鉴定结果与预期目的条带大小相符;h MSH2-EGFP融合蛋白在NCI-H520细胞中得到表达,过表达h MSH2的NCI-H520细胞表面的h MSH2分子水平显著升高(P〈0.001);γδT细胞对过表达h MSH2的NCI-H520细胞的杀伤效率较野生型NCI-H520细胞显著升高(P〈0.05)。结论 成功构建h MSH2分子过表达的肺癌细胞模型;细胞膜上表达水平上调的h MSH2分子增强了γδT细胞对肺癌细胞的细胞毒作用。
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