MicroRNA-29b重组慢病毒表达载体的构建及其抑制胃癌细胞系的迁移和增殖
【出 处】:
【作 者】:
蒋崇亮
[1] ;
汪晓艳
[1] ;
龚佳男
[2] ;
王芳
[2] ;
余隹
[2] ;
冯涛
[1]
【摘 要】目的构建has-miR-29b重组慢病毒的表达载体,并观察其对胃癌细胞系迁移和增殖能力的影响。方法将PCR扩增的miR-29b前体序列和pMIR载体经双酶切后连接产生pMIR-miR-29b慢病毒表达载体。pMIR-miR-29b、Packaging Plasmid(s)和pVSV-G质粒共转染包装细胞系293TN,包装产生慢病毒。使用收获的慢病毒颗粒感染胃癌细胞系HGC-27,72 h后利用real-time PCR检测miR-29b在HGC-27内的表达水平,Western blot检测其靶基因MCL-1的表达。划痕实验和细胞增殖实验分别观察在HGC-27细胞中过表达miR-29b后细胞迁移能力及增殖能力的变化。结果成功构建了miR-29b重组慢病毒的表达载体,感染胃癌细胞HGC-27后,能够成功过表达miR-29b。在HGC-27细胞中过表达miR-29b,其靶基因MCL-1的表达明显被抑制,并且Lenti-29b组与对照组Untreat组和Lenti-vector组相比,Lenti-29b组的迁移能力显著降低(P〈0.01);Lenti-29b组与Lenti-vector组相比,Lenti-29b组在48、72及96 h 3个时间点的增殖能力均显著下降(P〈0.01)。结论成功获得过表达miR-29b的重组慢病毒颗粒,miR-29b能够抑制其靶基因MCL-1的表达,并对HGC-27细胞的迁移和增殖有明显的抑制作用。