PNPLA3基因表达以及干扰腺病毒的构建及鉴定
【出 处】:
【作 者】:
乔爱君
[1] ;
方福德
[1] ;
常永生
[1]
【摘 要】目的构建糖脂代谢和脂肪肝相关基因PNPLA3过表达以及干扰腺病毒载体并加以鉴定。方法根据PNPLA3基因序列设计过表达以及干扰序列引物,定向克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV的BglⅡ和XhoⅠ位点,干扰序列克隆入pAdTrack-U6穿梭载体,PmeⅠ酶切线性化穿梭质粒与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共转化E.coliBJ5183感受态细菌产生重组腺病毒载体,用PacⅠ酶切线性化的回收质粒转染293A细胞包装腺病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察293A细胞绿色荧光蛋白的表达,并初步观察其感染小鼠原代细胞的效率。结果测序、酶切鉴定证实,构建出了PNPLA3基因过表达及干扰腺病毒载体。包装的腺病毒浓缩悬液滴度为1.5×1011VP/mL。以120感染复数感染小鼠肝脏原代细胞,感染效率可达到90%以上,干扰效率超过80%以上。结论成功构建了PNPLA3基因的过表达以及干扰腺病毒载体。
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