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【摘 要】目的 研究抑癌microRNA（Let-7a）在Ewing肉瘤细胞系中的靶基因.方法 用Northern blot分析细胞系中Let-7a的表达量;构建pMIR-reporter-CDK6野生型（CDK6_WT）或突变型（CDK6_MUT）及阳性对照（Let-7a_PC）质粒;体外合成的寡核苷酸（Let-7a_mimic）转染Ewing肉瘤细胞系SK-ES-1,用real time PCR检测Let-7a的表达;通过生物信息软件分析、双荧光素酶报告实验和Western blot寻找并确定Let-7a的靶基因.结果 Let-7a在Ewing肉瘤细胞系中系低表达,以MSCs为参照,SK-ES-1 Let-7a/U6 snRNA灰度值最高为：0.193±0.024（P＜0.05）;双酶切和DNA测序鉴定质粒构建成功;在SK-ES-1细胞中成功过表达Let-7a（P＜0.01）;野生型CDK6（CDK6_WT）荧光素酶表达水平与对照组和突变型CDK6（CDK6_MUT）相比明显下降（P＜0.05）;在SK-ES-1细胞系中过表达Let-7a抑制了CDK-6 mRNA和蛋白质的表达.结论 确定了抑癌micmRNA（Let-7a）在Ewing肉瘤细胞系中靶基因,为进一步实验奠定了基础.