KLF9基因腺病毒载体的构建及其抗ROS功能
【出 处】:
【作 者】:
【摘 要】目的构建及鉴定KLF9基因过表达的腺病毒载体,初步研究KLF9在对抗反应活性氧方而的功能。方法克隆KLF9过表达质粒,定向克隆人穿梭载体pAdTrack—CMV,PmeI酶切线性化,转化E.coli.BJ5183(含腺病毒载体pAdEasy-1)感受态细菌,产生重组腺病毒载体。重组载体经过卡那霉素抗性筛选和限制性内切酶分析确重组后,再用Pac I线性化重组质粒,同收,转染293A细胞,7—12d包装产生病毒颗粒。利用H2O2和过表达KLF9的腺病毒处理体外培养的C57BIJ6J小鼠原代肝脏细胞,实时定量PCR检测KLF9和抗ROS基因(CAT、SOD2和GPx1)的表达。结果H2O2可以刺激C57BIJ6J小鼠原代肝脏细胞KLF9和抗ROS基因的表达上调(P〈0.05)。定虽PCR以及Western blot结果显示成功包装过表达KLF9腺病毒,感染效率达90%以上。过表达KLF9可以上调抗ROS基因的表达水平(P〈0.05)。结论初步认定KLF9基因可参与C57BL/6J小鼠原代肝脏细胞中抗ROS基因的调节。
上一篇:利用流式细胞术检测LPS刺激活化后小鼠腹腔巨噬细胞体积的变化
下一篇:小鼠皮质神经祖细胞分化过程中Twist1的功能