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【摘 要】目的建立敲除基因组中PDEIOA基闪的CRISPR／Cas9系统。方法设计3个长20bp的sgRNA，分别靶mPDEIOA的exon6、exon7和exon11。化学合成sgRNA寡核苷酸序列，并克隆进PX330质粒中。将克隆诈确的质粒PX330-sgRNA转染至HEK293T细胞中，提取基因组DNA并对敲除位点附近的DNA片段进行PCR扩增，再通过SURVEYOR分析和一代测序对敲除效率进行检测。最后采用有限稀释法挑选稳定敲除PDEIOA的HEK 293T细胞株。结果日的sgRNA寡核苷酸双链成功插入PX330质粒中且序列正确；靶向Exon7的sgRNA可成功敲除PDEIOA，且敲除效率高达31．4％；稳定敲除PDEl0A的细胞株筛选成功，可导致2bp缺失。结论PDEIOA皋冈CRISPR／Cas9敲除系统构建成功。