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您现在所在位置:首页 > 期刊导读 > 2014 > 04 > 信息摘要

miR-30a表达载体构建、病毒包装和表达活性的检测

【出 处】:

【作 者】:

【摘 要】目的构建携带miR-30a的慢病毒表达载体,为研究miR-30a在慢性粒细胞白血病中的作用机制及对伊马替尼耐药性的影响奠定基础。方法提取人骨髓细胞基因组DNA,扩增miR.30a的前体序列,克隆到plVTHM慢病毒表达载体上,测序鉴定。重组载体进行病毒包装,感染K562细胞,测定病毒滴度。感染的K562细胞用流式细胞仪分选带有绿色荧光的GFP阳性的细胞,对分选的细胞用实时荧光定量PCR法检测miR-30a在细胞内的表达水平。最后用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况。结果重组慢病毒表达载体测序完全正确;病毒滴度检测为6×106TU/mL;选用160μL 病毒液/1mL培养基感染K562细胞;感染的K562细胞中miR-30a的表达水平显著增强(P〈0.05);过表达miR-30a后K562细胞增殖水平显著下降(P〈0.05)。结论成功构建了miR-30a慢病毒表达载体,并可在K562细胞中稳定表达,且miR-30a有抑制K562细胞增殖的作用。

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