HCV5’UTR靶向性人工M1GS核酶的胞内抗病毒活性
【出 处】:
【作 者】:
张文军
[1] ;
黄志文
[1] ;
李喜芳
[1] ;
张成成
[1] ;
刘映乐
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【摘 要】目的基于大肠埃希菌核糖核酸酶P的催化性RNA亚基(M1 RNA),人工构建一种抗丙肝病毒(HCV)的新型靶向性核酶,并进一步鉴定其胞外靶向切割活性及胞内抗病毒作用。方法首先采用计算机软件对HCV基因组保守区——5’非翻译区(5’UTR)的序列与结构进行分析,以确定候选靶位。针对靶位的侧翼序列,设计与之互补的引导序列(GS),然后通过PCR将其共价连接至M1 RNA的3’末端,从而构建靶向性的M1Gs核酶。结果针对HCV5’UTR第67位的胞嘧啶成功构建了一种M1GS核酶——M1GS—HCV/C67。该人工核酶不仅在体外可对靶RNA片段产生特异性切割,在HCV感染的宿主细胞内也能够显著抑制HCV核心蛋白的表达(P〈0.05),并使上清液HCV RNA的拷贝数减少约800倍(P〈0.01)。结论M1GS—HCV/C67,这种新型靶向性核酶具有良好的体外抗HCV活性,其成功构建为HCV感染的治疗研究提供了另一种潜在途径。
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