在SW480细胞中沉默Survivin基因抑制细胞增殖及hTERT表达
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【摘 要】目的 观察生存素(SURVIVIN)基因干扰对SW480细胞增殖的影响,探讨其干扰对hTERT基因表达的影响及机制。方法 构建携带Survivin小发夹干扰RNA的重组表达载体pGenesil-1.1-Survivin,转染结肠癌SW480细胞,MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞增殖周期;荧光定量PCR和Western blot检测Survivin、hTERT和Sp1的mRNA和蛋白表达,TRAP-ELISE 法检测端粒酶活性。构建靶向Sp1基因的RNA干扰载体转染SW480细胞,检测hTERT基因mRNA和蛋白水平及端粒酶活性。 结果 Survivin基因干扰后,SW480细胞增殖受到明显抑制,增殖抑制率为34.44%(P〈0.05),G0/G1期细胞增加,S期和G2/M期细胞减少(P〈0.01)。hTERT和Sp1基因的mRNA和蛋白表达水平显著降低,端粒酶活性降低(P〈0.01)。Sp1基因干扰后,hTERT基因的mRNA和蛋白表达水平及端粒酶活性下降(P〈0.01)。结论 靶向沉默Survivin基因对SW480细胞增殖有明显的抑制作用;同时下调hTERT基因表达,其机制可能与Sp1基因表达下调有关。
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