Wnt/β-catenin信号途径抑制Raw264.7分化
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【摘 要】目的了解Wnt/β-catenin信号途径对小鼠单核/巨噬细胞Raw264.7的分化调控。方法将细胞分为4组:阴性对照组(即空Raw264.7组)、实验对照组(即感染Ad-GFP组)、阳性对照组(即50ng/mLRANKL诱导组)和实验组(即感染Ad-β-catenin组)。分别给予上述4组处理因素后常规细胞培养3、6和9d提取细胞总RNA,荧光定量real—time(RT—PCR)检测核因子受体(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K(CathepsinK)及金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达,再于同样处理因素培养6d通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察Raw264.7的分化情况;Western blot检测TRAP、CathepsinK蛋白的表达。结果RT—PCR检测Ad.B—catenin组能下调RANK、TRAP、Cathepsin K和删P-9mRNA的表达;TRAP染色显示50ng/mLRANKL诱导组能成功诱导Raw264.7成多核细胞,空白组和Ad—GFP组有个别多核细胞,Ad-β-catenin组为单核细胞;Westernblot检测显示Ad-β—catenin组TRAP、CathepsinK蛋白表达降低(P〈0.05)。结论Wnt/β-catenin信号途径能抑制RAW264.7分化成熟为破骨细胞。
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