CD45RO N-糖基化位点对galectin-3结合CD45RO突变体转染细胞的影响
【出 处】:
【作 者】:
【摘 要】目的构建CIM5RO不同N-糖基化位点突变的T细胞株,并检测其与galectin-3的结合情况。方法采用N—Q定点突变技术分别去除CD45RO的11个N-糖基化位点,制备单个N-糖基化位点缺失的CD45RO,然后将其导入慢病毒表达载体pWPXL中,11个携带单个N-糖基化位点缺失的CIM5RO重组慢病毒质粒与慢病毒包装质粒psPAX2和MD2.G共转染293T细胞,将包装重组慢病毒感染CD45-的J45.01细胞,流式分选后获得11株分别表达CD45RO单个N-糖基化位点缺失的J45.01T细胞株。通过liT-PCR和流式细胞术分别从RNA水平和蛋白水平验证CD45RO突变体的转录和表达,应用流式细胞术检测CD45RO突变细胞株与galectin-3的结合情况。结果成功构建了11个CD45RO单个N-糖基化位点缺失的T细胞株,各突变细胞株能稳定表达突变基因,经测序再次证实突变位点正确,CD45RO突变体能稳定表达于细胞表面。galectin-3与N327Q突变细胞的结合明显增强,与N36Q突变细胞和N217Q突变细胞的结合明显减弱。结论CD45RON-糖基化位点对galectin-3与CIM5RO-J45.01细胞的结合有调节作用。
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