结核分枝杆菌EIS基因抑制人肺腺癌A549细胞自噬
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【摘 要】目的构建结核分枝杆菌EIS基因表达质粒,探讨其对人肺腺癌A549细胞自噬的影响。方法采用PCR技术扩增EIS基因片段并插入空载质粒pcDNA3.1-3flag中,双酶切、测序鉴定克隆质粒的正确性;将重组质粒与对照空载质粒分别与自噬体荧光表达质粒GFP-LC3共转染细胞并以自噬诱导剂雷帕霉素处理,荧光显微镜下观察自噬荧光并计数,Westernblot检测EIS蛋白及自噬蛋白LC31I/I的表达水平。结果成功构建EIS基因重组表达质粒PcDNA3.1.EIS-3flag,该质粒共转染细胞组自噬荧光小点较对照组明显减少(P〈0.05),重组质粒表达42ku看到蛋白并可抑制自噬蛋白表达水平。结论结核分枝杆菌EIS基因可抑制A549细胞自噬的形成,其抑制作用与结核分枝杆菌持留性相关。
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