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【摘 要】目的构建并应用原核表达体系表达能体外刺激人γδT细胞增殖的抗人γδTCR单链抗体。方法在成功建立稳定分泌鼠抗人γδTCR单克隆抗体杂交瘤细胞系G5-4的基础上,通过RT-PCR,扩增得到该单克隆抗体的重链（VH）和轻链（VL）可变区基因;通过搭桥PCR法,用连接肽（Gly4Ser）3,将VH和VL连接起来,构建了抗人γδTCR单链抗体G5-4ScFv基因。将该基因插入原核表达载体pET22b（＋）,并在大肠杆菌TransB（DE3）中经IPTG诱导表达。通过SDS-PAGE,Werstern blot进行鉴定,并通过流式、固相扩增、细胞因子检测、杀伤检测等方法分析单链抗体G5-4ScFv的生物学功能。结果单链抗体G5-4ScFv的相对分子质量约30 ku,能与γδTCR特异结合;固相化能刺激人PBMC中γδT细胞增殖,2周时其纯度可达90%;扩增得到的γδT细胞能有效杀伤肿瘤细胞系,如Daudi细胞,并在刺激时能有效分泌IFN-γ和TGF-α。结论成功构建并表达了具有生物学活性的抗人γδTCR单链抗体G5-4ScFv,为进一步研究其用于制备肿瘤过继免疫治疗用细胞制剂奠定了基础。