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【摘 要】目的利用重组腺病毒载体携带短发夹RNA（shRNA），使难于转染的悬浮细胞达到较高的目的基因沉默效率。方法分别将含有人胎盘生长因子（PLGF）的干扰序列及阴性对照序列（scramble）连人pRNAT—H1．1／Adeno载体，获得重组穿梭质粒；将线性化的重组穿梭质粒与腺病毒骨架重组；将重组子转染HEK293细胞，经过3轮病毒包装，收获病毒颗粒并测定滴度。病毒颗粒感染悬浮细胞——人小细胞肺癌细胞（NCI-H250和NCI-H209），通过实时定量PCR方法鉴定靶基因沉默效应，并利用肿瘤细胞重建基质膜侵袭实验进行功能鉴定。结果成功构建带有靶基因干扰序列及scramble、空载体的3种腺病毒重组子（AD-shuttle-shPLGF、AD-shuttle．scramble和AD-shuttle）。经过HEK293细胞包装，最终获得3株病毒颗粒，病毒滴度分别为1．5×1011、1．6×1011和1．6×1011。NCI-H250和NCI．H209细胞感染腺病毒颗粒48hA，大部分细胞表达GFP，感染率接近100％；且两株细胞感染AD—shuttle．shPLGF病msh后，PLGFmRNA表达水平降低（P〈0．01），肿瘤细胞侵袭能力明显下降（P〈0．01）。结论携带shRNA的腺病毒表达载体可以代替电转、脂质体介导等方法，使难于转染细胞的目的基因达到有效沉默。