【出 处】：

【作 者】：

【摘 要】目的引入易错PCR和DNA-shuffling技术构建高库容量的单链抗体库。方法收集不同年龄、性别、健康状态的人的静脉血各5 mL,提取单个核细胞总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增VH和VL基因,应用易错PCR对VH和VL基因进行突变,同时用DNA-shuffling技术对全长单链抗体基因进行体外改组,获得的分子与T载体连接,转化E.coli DH5α,选取阳性克隆,经菌落PCR后酶切鉴定抗体库多样性,计算分析单链抗体库容量。结果成功构建了库容量为4.37×1013的单链抗体库,经酶切鉴定,初步判定抗体库多样性良好。结论引入易错PCR和DNA-shuf-fling技术,成功构建了单链抗体库,为后续筛选高亲和力抗体奠定了实验基础。